全式金Trans5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（CD201-02）是經(jīng)過(guò)特殊工藝制作的細(xì)胞，適用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒DNA進(jìn)行測(cè)試時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可高達(dá)每微克DNA超過(guò)108個(gè)轉(zhuǎn)化單位（cfu）。該菌株的基因型為F-φ80d lacZ△M15△(lacZYA-argF)U169 end Al recA1 hsdR17(rk-,mk+)supE44λ-thi-1 gyrA96 relA1 phoA。

全式金Trans5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（CD201-02）也適用于藍(lán)白斑篩選，其突變基因recA?和endA?有助于克隆DNA的穩(wěn)定性和高純度質(zhì)粒DNA的提取。這種細(xì)胞可以在-70℃保存六個(gè)月，但不適合在液氮中保存。請(qǐng)注意遵循適當(dāng)?shù)拇鎯?chǔ)條件以確保細(xì)胞的長(zhǎng)期保存和使用質(zhì)量。

操作方法：

·取50 ml冰浴上融化的感受態(tài)細(xì)胞，加入目的DNA，輕輕混勻，在冰浴中放置30分鐘。

·42℃水浴熱激45秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

·向每個(gè)離心管中加入500μ無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃，200rpm培養(yǎng)1小時(shí)使細(xì)菌復(fù)蘇。

·根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求(質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化)，吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

· 避免反復(fù)凍融：盡量避免頻繁地凍融細(xì)胞。每次解凍后，盡可能立即進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，而不是將其再次冷凍。

· 避免使用移液槍吹吸：在操作過(guò)程中，盡量避免使用移液槍進(jìn)行強(qiáng)力吸取和排放細(xì)胞。這樣可以減少對(duì)細(xì)胞的機(jī)械壓力和損傷。

· 輕柔操作：在整個(gè)操作過(guò)程中要注意輕柔處理細(xì)胞。避免過(guò)度搖動(dòng)或震蕩細(xì)胞，以防止細(xì)胞破裂或損壞。

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