產(chǎn)品名稱：瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：TD408- 10 (10 次反應(yīng))

TD408-50 (50 次反應(yīng))

TD408-200 (200 次反應(yīng))

產(chǎn)品特點(diǎn)：

可在 25 µl 的洗脫液中回收到超純的 DNA，并且對(duì)于一系列下游的分子生物實(shí)驗(yàn)非常理想. ?

此過(guò)程與 TAE 或者 TBE 緩沖的凝膠是兼容的. ?

切下范圍在 50bp 到 23kb 之間的 DNA 回收率為 50%-90%. 并且不會(huì)發(fā)生像常在玻璃奶和基于陽(yáng)粒子樹(shù)脂過(guò)程中的 DNA 切變現(xiàn)象. ?

本產(chǎn)品僅供科研使用

試劑制備：

DNA在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在試劑瓶上做好標(biāo)記?。?！

10次反應(yīng)的DNA洗滌液應(yīng)按照標(biāo)簽上的提示添加100%的乙醇；

50次反應(yīng)的DNA應(yīng)添加24ml 100%的乙醇(26 ml 95%的乙醇)到6ml的DNA中；

100次反應(yīng)的DNA應(yīng)添加48ml 100%的乙醇(52 ml 95%的乙醇)到12ml的DNA中；

200次反應(yīng)的DNA應(yīng)添加96ml 100%的乙醇(104 ml 95%的乙醇)到24ml的DNA中。

產(chǎn)品特性：

DNA純度-洗脫到的高質(zhì)量、純化的 DNA 尤其適用于 DNA 測(cè)序, DNA 連接, 內(nèi)切酶消化,基因芯片；

DNA大小-50 bp 到 23 kb 之間；

DNA回收率-一般的，可在 10 µl 的水中洗脫出 5 µg 的 DNA 。對(duì)于從 50bp 到10kb 的DNA，回收率為 70%-90% ，對(duì)于從 11kb 到 23kb 的 DNA ，回收率為 50-70%；

樣品來(lái)源-來(lái)自 PCR， 限制性內(nèi)切酶消化， 質(zhì)粒抽提， 激酶反應(yīng)，等的DNA和在TAE 或TBE緩沖的瓊脂糖凝膠切片中的 DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。

2. 改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH 緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。

3. 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。

4. 此試劑盒中吸附膜吸附DNA的效率很高。但如果切下來(lái)的凝膠中含有電泳緩沖液太多，造成溶膠后溶膠液pH偏高，會(huì)導(dǎo)致回收率降低。

操作方案：

以下離心操作步驟的離心力均在 10,000 - 16,000 x g 之間進(jìn)行。

1. 使用刀片或手術(shù)刀把 DNA 片段從瓊脂糖凝膠上切除下來(lái)并且移置到 1.5 ml 小型離心管內(nèi).

Note: 從凝膠上切下的瓊脂糖盡可能的要少.

2. 將 3 倍體積的 溶膠液 添加到每 1 體積從凝膠上切下的瓊脂糖切塊中.

Example:對(duì) 于 200 µl (mg) 的 瓊 脂 糖 凝 膠 切 塊 ， 添 加 600 µl 的 ADB 緩沖液.

3. 在 37-55?C 下溫水浴 10~20 分鐘直到凝膠切塊溶解.

Note: 確定凝膠切塊溶解是很重要的步驟. 在溫水浴過(guò)程中可輔以溫和的攪拌有助于凝膠的溶解。 如果 DNA 大小超過(guò) 8kb ，加熱之后需要額外添加等量膠塊體積的水。例如： 200 µl (mg) 的瓊脂糖凝膠切塊，添加 600 µl 的 ADB 緩沖液.加熱之后添加 200µl 的水。

4. 將溶解的瓊脂糖切塊溶液放到 2 號(hào)柱 中并把柱套在 收集管 里.

5. 離心 1 分鐘. 去除濾出液. Note: 柱所能容納的樣品體積為 800 µl. 所以, 如果樣品體積超過(guò) 800 µl 時(shí)，柱就要被多次填充和離心。

6. 添加 200 µl 的 DNA 洗滌液 到柱中離心 1 分鐘，去除濾出液.

7. 重復(fù)第 6 步洗滌步驟.

8. 可選步驟：將收集管中的廢液倒掉，并將 2 號(hào)柱套回收集管中額外離心2 分鐘，盡量除去洗滌液，以免洗滌液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

9. 直接添加 25 µl DNA 洗脫液到柱基質(zhì)中. 將柱套在 1.5 ml 離心管中離心 1 分鐘來(lái)洗脫

DNA.Note :從柱中洗脫出的 DNA 產(chǎn)量與 pH 和溫度有關(guān). 如果使用水來(lái)洗脫， 確保 pH 是>6.0. 在向柱中加入水后靜置 1 分鐘可增加較大 (> 6 kb) DNA 的產(chǎn)量.在 60-70 oC 的水中洗脫 DNA 可增加較大DNA(> 10 kb)的產(chǎn)量

Note: 如果試驗(yàn)需要的話 TE 緩沖液 (10 mM Tris-HCl， 1 mM EDTA， pH 8.0) 或改進(jìn)的TE (10 mMTris-HCl， 0.1 mM EDTA， pH 8.5) 也可用來(lái)洗脫.

在水中得到的超純 DNA 可進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn).

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