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一、前言生物制藥是利用生物技術(shù)從組織、細(xì)胞等生物體中分離出有效成分后制備出的用于預(yù)防、治療和診斷的制品，如疫苗，重組蛋白藥等。目前，已開(kāi)發(fā)出多種生產(chǎn)用的細(xì)胞系，如CHO細(xì)胞、大腸桿菌、VERO細(xì)胞等細(xì)胞系。然而這些通過(guò)大腸桿菌，CHO細(xì)胞等培養(yǎng)生產(chǎn)的生物制劑會(huì)含有宿主細(xì)胞殘留DNA等特定的雜質(zhì)，殘留DNA會(huì)引發(fā)潛在的安全問(wèn)題（如潛在致瘤性、傳染性，甚至增加免疫源性或?qū)е峦蛔儯韵嚓P(guān)的法律法規(guī)相繼出臺(tái)，以對(duì)生物制品中外源宿主DNA殘留量進(jìn)行嚴(yán)格把控。如WHO和美國(guó)FDA現(xiàn)行...

一、DH5αDH5α是大腸桿菌(Escherichiacoli)的一種感受態(tài)細(xì)胞系，通常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。這些細(xì)胞被設(shè)計(jì)成對(duì)外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。DH5α感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于吸收外源DNA特別有效，這使得它們?cè)诨蚬こ毯头肿由飳W(xué)研究中成為常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室工具。二、操作步驟1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過(guò)夜（約16小時(shí)）；2、取1ml過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100mlLB培養(yǎng)基中，...

一、實(shí)驗(yàn)原理BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法，測(cè)定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應(yīng)，使其由原來(lái)的蘋(píng)果綠形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm有強(qiáng)烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測(cè)定。?二、操作步驟準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品和樣品?：將標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（如牛血清白蛋白BSA）稀釋成一系列已知濃度的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。同時(shí)，將待測(cè)樣品適當(dāng)稀釋?zhuān)_保其在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍內(nèi)...

方法一：1.根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。2.樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。3.用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4.提取上清夜，樣品制備完成。5.蛋白質(zhì)提取液：300ml1Mtris-HCl（PH8）45ml甘油（Glycerol）75ml聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂...

一、LNA的介紹鎖核酸（Lockednucleicacid，LNA）是一種經(jīng)過(guò)修飾的RNA，LNA中一部分核糖上的2'與4'碳連結(jié)在一起。一般可見(jiàn)于A-DNA或RNA。這類(lèi)核酸可以增加引物或探針（probe）的融解溫度（Tm值），加強(qiáng)這些實(shí)驗(yàn)用物質(zhì)的穩(wěn)定性，可應(yīng)用在即時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)（real-timePCR）等技術(shù)中。近期,鎖核酸(lockednucleicacid,LNA)作為一種新穎的核苷酸衍生物在藥學(xué)研究領(lǐng)域引起了人們的廣泛關(guān)注,有希望成為分子水平治療各種疾病的新突破...