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慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞全流程詳解一、細(xì)胞種板將細(xì)胞種在12孔板中，每孔1.5×10^5個(gè)細(xì)胞。每孔加入1mlwan全培養(yǎng)基。二、病毒感染1.待細(xì)胞生長(zhǎng)至30%～50%時(shí)開(kāi)始轉(zhuǎn)染。2.將病毒從冰箱取出，放在冰上融化。3.打開(kāi)生物安全柜，關(guān)閉風(fēng)機(jī)，戴好帽子和口罩。4.棄去培養(yǎng)基，用PBS洗三次。5.每孔加入500ulwan全培養(yǎng)基。6.根據(jù)公式計(jì)算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）=MOIx細(xì)胞數(shù)/病毒滴度（TU/mL）×1000。7.4小時(shí)后，再向孔板中加入500ulwan全培養(yǎng)基...

WB（WesternBlot）是一種常用的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于檢測(cè)和分析蛋白樣品中特定蛋白質(zhì)的存在和表達(dá)水平。它通過(guò)將樣品中的蛋白質(zhì)分離并轉(zhuǎn)移到膜上，然后使用特定的抗體識(shí)別目標(biāo)蛋白，并通過(guò)化學(xué)或免疫檢測(cè)方法來(lái)可視化這些蛋白質(zhì)。WesternBlot技術(shù)通常包括樣品制備、SDS-PAGE電泳分離、蛋白轉(zhuǎn)印、封閉和抗體檢測(cè)、曝光顯影等步驟。目前WB被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中，用于研究蛋白質(zhì)表達(dá)、翻譯后修飾以及蛋白質(zhì)相互作用等。圖1.WB流程圖在日常實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，小分子蛋白是非常常...

不知道大家是否會(huì)遇到細(xì)胞凍存的時(shí)候狀態(tài)非常不錯(cuò)，結(jié)果等到需要用到該細(xì)胞的時(shí)候怎么也復(fù)蘇不起來(lái)的情況??？或許可能是凍存細(xì)胞的時(shí)候出現(xiàn)了什么差錯(cuò)？一.細(xì)胞凍存的原則：慢凍，細(xì)胞在冷凍過(guò)程中，如果降溫過(guò)快，會(huì)形成大的冰晶，這些冰晶會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。詳細(xì)版本見(jiàn)《細(xì)胞凍存的原理是什么？》二.凍存液的配置：常用配置比例：培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1適用于大多數(shù)細(xì)胞系，能夠保證細(xì)胞在凍存過(guò)程中有較高的存活率。血清:DMSO=9:1適用范圍：適用于需要長(zhǎng)時(shí)間保存或者具有特別...

CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。基本原理：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liu酸2甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增...

前面我們?cè)谖恼隆稙槭裁碈CK8鏡下趨勢(shì)是對(duì)的，測(cè)出來(lái)的OD值卻不對(duì)？？》中cue到過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)，那么CCK8具體到底是什么呢，讓我們今天一起詳細(xì)了解下吧~一、CCK-8實(shí)驗(yàn)的基本定義與原理CCK-8實(shí)驗(yàn)是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究的細(xì)胞增殖和毒性檢測(cè)方法。其基本原理在于利用細(xì)胞內(nèi)的代謝酶將無(wú)色的CCK-8試劑（CellCountingKit-8）中的WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）還原為具有高...